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RIPA裂解液是一种传统的组织以及细胞快速裂解液，主要用于从动物组织和哺乳动物细胞中抽取可溶性蛋白，可用于裂解贴壁细胞和悬浮细胞。按照其裂解液的强度可以分为强、中、弱三类，具体特点和差异请参考附表2，可根据实验需求选择相应产品。RIPA裂解液（强）可以有效提取细胞核、细胞膜和胞浆蛋白，提取的蛋白可应用于蛋白定量、Western Blot、IP等检测分析。

• 为防止蛋白降解，所有的操作尽量在冰上进行。
  
• 使用RIPA裂解液得到的蛋白样品，可采用BCA法进行蛋白定量，以测定蛋白浓度。
  产品可单独向本公司订购，如：BCA蛋白定量试剂盒(货号：WE0276)。本制品含有高浓度的去垢剂，不能用Bradford法进行蛋白定量。
  
• 建议在使用RIPA裂解液前，向溶液中加入蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，以防止蛋白降解，或保持蛋白的磷酸化状态。产品可单独向本公司订购，如：蛋白酶抑制剂混合物(货号：WE0259)，蛋白磷酸酶抑制剂混合物(货号：WE0256)。
  
• 若需获得更高浓度的蛋白，应减少哺乳动物蛋白抽提试剂的使用量。
  
• 对于培养瓶中的贴壁细胞，推荐先使用常规方法消化细胞，再参考悬浮细胞蛋白提取步骤操作。
  
• 对于离心获得的细胞，若不确定细胞体积，可根据细胞数量计算RIPA裂解液的使用量。如5×10⁶个Hela细胞约需加入500μL RIPA裂解液，以此类推。

• 细胞样品
  
  • 贴壁细胞蛋白抽提
    
    • 小心倾去贴壁细胞的培养液。
      
    • 可选步骤：若培养基中含有酚红或其他可能影响实验结果的物质，请先使用预冷的PBS漂洗细胞。
      
    • 加入适量RIPA Lysis Buffer（Strong）（使用前2～3分钟内加入蛋白酶抑制剂），试剂使用量请参考附表1，在冰上用枪头吹打贴壁细胞。
      表1：贴壁细胞RIPA裂解液使用量推荐表
      

      细胞培养板类型或培养面积	RIPA裂解液使用量
      100mm	500-1,000μL
      60mm	250～500μL
      6孔培养板	200～400μL/孔
      24孔培养板	100～200μL/孔
      96孔培养板	50～100μL/孔

    • 将裂解液转移至新的离心管中，冰上孵育20分钟，使细胞充分裂解。
      
    • 14000×g离心10分钟。转移上清液至新管中，进行下一步分析。
  • 悬浮细胞蛋白提取
    
    • 悬浮细胞，2500×g离心5分钟，弃去上清。
      
    • 可选步骤：若培养基中含有酚红或其他可能影响实验结果的物质，请使用PBS漂洗细胞。漂洗后的细胞悬浮液2500×g离心5分钟，弃去上清。
      
    • 加入适量RIPA Lysis Buffer（Strong)（使用前2～3分钟内加入蛋白酶抑制剂），每5×10⁶细胞加入约200～500μL RIPA Lysis Buffer（Strong），吹打均匀。
      
    • 冰上放置20分钟，使细胞充分裂解。
      
    • 14000×g离心10分钟。转移上清液至新管中，进行下一步分析。
• 组织样品
  
  • 取适当的RIPA Lysis Buffer（Strong），在使用前2～3分钟内加入蛋白酶抑制剂。
    
  • 称量实验组织的重量，按照1:10（g/ml）的比例加入RIPA Lysis Buffer（Strong）后将组织剪成细小碎片，用电动匀浆器匀浆处理。若需要浓缩的蛋白提取物，可适当减少组织蛋白抽提试剂使用量。
    
  • 冰上孵育20分钟，使细胞充分裂解。
    
  • 14000×g离心10分钟。转移上清液至新管中，进行下一步分析。
    注：RIPA裂解液的裂解产物中可能会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为基因组。